PARTES EXTERNAS DE LOS APARATOS Y SU FUNCION
ESPECTROFOTOMETRO
1.- botón encendido y calibración al aire (0% T). Nos
permite primeramente encender y apagar el aparato, posteriormente, calibrar el
aparato al valor de 0%de T.
2.-co la celda partimiento de la muestra. Nos
permite colocar la celda (recipiente) que contenga la muestra.
3.- foco del piloto, nos indica que el aparato esta
encendido y podemos leer las escalas de absorbancia y transmitancia: la primera
logarítmica, de 0 a 2.0,en ella podemos leer el valor de absorbancia que
registre el aparato y, en la segunda escala decimal de 0 a 100%, el vlor de
transmitancia que registre el aparato.
4.- botón selector de la longitud de onda. Nos
permite seleccionar la longitud de onda de trabajo en nm y la izquierda la
escala de longitud de onda en nm.
5.- botón de calibración con el blanco o
testigo. Nos permite calibrar el aparato
al valor de cero A o 100% de T. utilizando el blanco o testigo.
1.- compartimiento de la muestra (simple
comperment).
Nos permite colocar la celda (recipiente) que
contenga la muestra.
2.- pantalla digital. Lectro óptico (digital readout).
En ella podemos leer el valor de la absorbancia, transmitancia, concentración o
el factor que registre el aparato.
3.- Tecla MODE o selectora de funciones (Duv mode
selector). T (ttransmitancia9, A (absorbancia), C (concentración) y F factor).
Nos permite seleccionar la función deseada T, A, C, o F.
4.- Tecla DEC (concentración adjustment controls).
De ajuste de concentración para incrementar los valores. Cuando de seleccione
la función de concentración para ajustar el valor de concentración de la
solución estándar (St). Con esta tecla se puede ir aumentando el valor que se
observa en la escala digital.
5.- tecla INC (concentración adjustment
controls). De ajuste de concentración
para disminuir los valores. Cuando se seleccione la función de concentración para ajustar
el valor de la solución estándar
(St), con esta tecla se puede ir disminuyendo el valor que se observa en la
escala digital.
6. Tecla para imprimir (Print Button). Cuando
el aparato está conectado a una computadora o
con un registrador de datos, con esta tecla se puede mandar a imprimir los
valores obtenidos de las lecturas.
7. interruptor (Lctmp Power Switch). Se
utiliza para encender las lámparas de
Tungsteno (VIS) y deuterio (UV). Sirve para encender la fuente luminosa que se
requiere trabajar.
8. Botón de encendido de la lámpara de deuterio (Deu-terium LampStarter
Button). Cuando se requiere utilizar la
fuente luminosa de deuterio, después de colocar el interruptor en la posición
correspondiente, es necesario oprimir este botón durante unos tres segundos
para que la fuente se encienda, si no se oprime este botón aunque el
interruptor indique deuterio, la fuente luminosa no se encenderá.
9. Botón de espejos (Mirror Lever) (VIS-UV). Nos permite seleccionar
la posición de VIS cuándo se requiere utilizar el aparato en la región
visible, y UV, para la región ultravioleta, orientando una serie de espejos que
se encuentran en la parte interna del aparato y así reflejar de la fuente
luminosa adecuada la energía necesaria y, después de atravesar la muestra problema,
reflejar la radiación transmitida hacia el íotodetector correspondiente de
acuerdo a la radiación utilizada.
10. Botón de encendido y apagado del aparato (Power Switch) (ON-OFF). Nos
permite encender o apagar el aparato.
11, Botón selector de longitud de onda
(Wavelength Selection). Nos permite seleccionar la longitud de onda de
trabajo en nm y al lado izquierdo inmediatamente la escala de longitud de onda,
en ella se lee la longitud de onda en nm, que se va seleccionando mientras se
gira el botón selector de longitud de onda.
Botón selector de sensibilidad (Lo-M-Hi) (Sensitivity Switch). Según
las necesidades de trabajo nos permite seleccionar una sensibilidad baja.
(Lo), media (M) o alta (Hi).
13. Botón de ajuste a O de A y 100% de T
(100% T Zero A Control), Nos permite calibrar el aparato al valor de O de A
o 100% de T, utilizando el blanco o testigo.
Los
espectrofotómetros que trabajan con radiación visible
tienen una trayectoria interna que se muestra en forma sintetizada como se
observa en la ilustración.
.jpg)
Los
espectrofotómetros que trabajan con la radiación. Visible
y ultravioleta presentan doble fuente ole radiación (lámparas) y dos foto
detectores (fototubos), y están equipados con espejos móviles para poder
reflejar la radiación en la dirección, necesaria. En la figura i'08 se muestra
cómo es la trayectoria interna en un espectrofo-tótnetro de radiación visible
ultravioleta.
3. Saque la celda con el blanco o testigo con
que se calibró al valor de cero de A del
compartimiento de la muestra y del portaceldas,
4. Intercambie en el portaceldas y en el
compartimiento de la muestra las diferentes soluciones estándar y problemas, para ir registrando las lecturas de cada una de
estas soluciones.
5. Elabore una tabla de valores que contenga la
concentración y lectura de cada una de las
soluciones de la serie, la longitud de onda seleccionada y el nombre del
compuesto, radical, o ion a determinar.
6. Dibuje en una hoja de papel milimétrico la curva de calibración.
7. Determine la lectura de la solución problema, si este valor no está comprendido entre los límites de la
curva de calibración, se hará una dilución.
8. Interpole la lectura de la solución problema en la curva de calibración y determine la concentración de
esta solución problema.
9. O bien, podrá utilizar el método directo o el método
del factor que más adelante se describirán.
Obtención de lecturas en el SP 21D utilizando la Junción T
1. Calibre el SP 21 D siguiendo los pasos
indicados en la técnica de calibración.
2. Presione la tecla MODE para colocar el cursor
colocar la posición de transmitancia T.
3. Saque la celda con el blanco o testigo con
que se calibró al valor de cien de T del
compartimiento de la muestra y del portaceldas.
4. Intercambie en el portaceldas y en el
compartimiento de la muestra las diferentes soluciones estándar y problemas para ir registrando las lecturas de cada una de
estas soluciones.
5. Elabore una tabla de valores que contenga la
concentración y lectura
de cada una de las soluciones de la serie, la longitud de onda seleccionada
y el nombre del compuesto, radical, o ion a determinar.
6. Dibuje en una hoja de papel semilogarítmico la curva de calibración.
7. Determine la lectura de la solución problema, si este valor no está comprendido entre los límites de la
curva de calibración, se hará una dilución.
8. Interpole la lectura de la solución problema en la curva de calibración y
determine la concentración de esta solución problema.
Obtención de resultados de concentración en el SP 2 ID utilizando la Junción C
1. Calibre el SP 21D, siguiendo los pasos
indicados en la técnica de calibración utilizando A
o T.
2. Presione la tecla MODE para colocar el cursor
en la posición de concentración C.
3. Saque la celda con el blanco o testigo del
compartimiento de la muestra y del porta celdas con que se calibró al valor de cero de A o 100% de T e introduzca en el portaceldas y
en el compartimiento de la muestra por la solución estándar.
4. Presione las teclas DEC o INC hasta que en la
escala digital aparezca el valor representativo de la concentración de la solución estándar.
5. Intercambie en el porta celdas y en el
compartimiento de la muestra las diferentes soluciones problema para ir
registrando las lecturas de concentración en forma directa de la escala digital
con sus unidades correspondientes (las unidades serán las mismas que se están
manejando para el estándar).
Aplicaciones
de la SP VIS-UV
La
espectrofotometría VIS-UV
tiene una gran aplicación en las determinaciones cuantitativas en muchas áreas,
las cuales, en su mayoría, en la actualidad están autorizadas por NOM
(Norma Oficial Mexicana) y se publican
Ejemplos
de las aplicaciones y determinaciones espectrofotométricas
• Determinaciones en los análisis clínicos en sangre
(mg/dl):
Glucosa
- Urea
- Creatinina
- Ácido úrico
- Colesterol
- Proteínas
- Bilirrubinas
- Hemoglobina
- Fosfatasa alcalina y acida
- Fósforo
- Calcio
- Albúmina
* En análisis de aguas potables y residuales:
tabla 15
Normas
para el análisis de aguas potables y
residuales
|
NOM
|
Aplicación
|
|
NMX-AA39
|
Determinación de
sustancias activas al azul de metileno en aguas residuales
(detergentes).
|
|
NMX-AA-44-1977
|
Determinación de cromo
hexavalente en agua.
|
|
NMX-AA-50
|
Determinación de
fenoles en agua.
|
|
NMX-AA-51
|
Determinación de
metales en el análisis de aguas.
|
|
MMX-AA-58
|
Determinación de
cianuros en el análisis de aguas.
|
|
NMX-AA-77
|
Determinación de
fluoruros en el análisis de aguas.
|
|
NMX-AA-78
|
Determinación de zinc
en el análisis de aguas.
|
|
NOM-AA-84-1982
|
Determinación de
sulfates en agua residuo y potable.
Determinación de
fosfatos en agua residuo
Se puede determinar la estructura de una sustancia por medio del
espectro de adsorción en UV e infrarrojo.
|
• En el área microbiológica y bioquímica:
En
el control de cinética enzimática (por ejemplo:
como las siguientes enzimas: sacarosa, invertasa, fructofurnosidasa, etc.),
determina los cambios por efecto de concentración de enzima, efecto por la
concentración de sustrato, efecto
causado por cambios de temperatura, efecto causado por los cambios de pH.
aj Determinación de fósforo en DNA.
b) Determinación del contenido de RNA (en el área de fermentaciones).
c) Determinación de digestibilidad in uitro (en el área de fermentaciones).
d) Determinación de concentración de alcoholes superiores (en el área de
fermentaciones).
• En el área de análisis de alimentos:
a) Determinación de nitrógeno proteico.
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